PRÁCTICA Nº50: DETERMINACIÓN DE UN Du

21/05/2015

OBJETIVO

Determinar la presencia de un Du en la superficie eritrocitaria.

FUNDAMENTO

El Du es un antígeno D débil, que no suele dar la cara en pruebas normales para el Rh.

Primero, sensibilizaremos los hematíes problema con un suero con anticuerpos anti-D.

Segundo, Los enfrentaremos al suero de Coombs.

• Si existe el antígenoDu en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana.
• Esto dará lugar a la aglutinación en presencia del suero Coombs, en una segunda fase.

MATERIAL NECESARIO

• 2 Tubos de centrífuga (Uno para compensar)
• Centrífuga
• Pipetas pasteur
• Gradilla
• Baño de agua
• Cronómetro
• Vaso de precipitado
• Pipeta de vidrio
• Prepipeta

REACTIVOS

• Suero anti-D humano
• Suero de Coombs
• Suero fisiológico

MUESTRA

Suspensión de hematíes al 5%.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

• Echamos en un tubo de hemólisis una gota de suero anti-D y una gota de suspensión de hematíes.

• Mezclamos suavemente e incubamos a 37ºC, 30-45′.

• Vemos el resultado: Si aglutina, no seguimos.
• Lavamos los hematíes en solución salina 3 veces. Para ello, añadimos 1ml de suero fisiológico y centrifugamos a 1000 rpm en cada lavado.

• Decantamos la solución salina completamente en el último lavado.
• Añadimos sobre el sedimento 1 gota de suero de Coombs y mezclamos suavemente.
• Centrifugamos durante 1′ a 1000 rpm.

RESULTADOS

Observamos si hay o no hay aglutinación, dando golpecitos suaves en el fondo del tubo.

• Si es +, hay antígeno Du en la membrana de los eritrocitos y se clasifica Rh+, variante Du.
• Si es -, se clasifica como Rh-.

En el caso +, hay que realizar una prueba de Coombs directa, para confirmar el resultado.

EJERCICIOS

1. ¿Qué contiene el suero de Coombs? Antiglobulina humana de conejo.

2. ¿Qué se detecta con la prueba directa? Anticuerpos incompletos que han sensibilizado a los hematíes «in vivo».

3. ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta? Anticuerpos incompletos libres en el suero o antígenos débiles en la membrana de los hematíes.

4. Qué buscamos en la sangre del paciente? Antígeno D débil.

5. Qué ocurre si el control es positivo? Que en la membrana de los hematíes hay antígeno Du.