PRÁCTICA Nº51: PRUEBA CRUZADA MAYOR

21/05/2015

OBJETIVO

Detectar posibles reacciones antígeno-anticuerpo, entre la sangre del donante y del receptor, antes de realizar una transfusión sanguínea.

FUNDAMENTO

Consiste en enfrentar el plasma del receptor, con los hematíes del donante:

1º En medio salino

2º En medio albuminoso

3º Frente a suero de Coombs, con el que detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana de los eritrocitos.

MATERIAL NECESARIO

• 2 tubos de hemólisis (uno de ellos para compensar)
• Pipetas pasteur
• Gradilla
• Cronómetro
• Lámpara visualizadora

REACTIVOS

• Suero salino
• Albúmina bovina al 30%
• Suero de Coombs

MUESTRA

• Plasma del receptor
• Hematíes del donante

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

• En un tubo de hemólisis depositamos 1 gota de hematíes del donante y dos gotas de plasma del receptor.
• Mezclamos suavemente y dejamos reposar unos 2-3′.

• Centrifugamos a 3000 rpm, durante 1′.

• Leemos el resultado con ayuda de la lámpara visualizadora.
• Si hay aglutinación NO SEGUIMOS. Si no hay, continuamos con el siguiente paso.
• Añadimos al tubo 3 gotas de albúmina al 30%.

• Mezclamos e incubamos a 37ºC durante 30′.
• Centrifugamos a 3000 rpm, durante 1′.
• Leemos el resultado con ayuda de la lámpara visualizadora.
• Si hay aglutinación NO SEGUIMOS. Si no hay, continuamos con el siguiente paso.
• Lavamos tres veces los hematíes con solución salina (añadimos 1ml y centrifugamos a 1000 rpm, 1′), para eliminar los anticuerpos no adheridos a los hematíes.
• Eliminamos bien el sobrenadante en el último lavado.
• Añadimos al tubo 1 gota de suero de Coombs y mezclamos.
• Centrifugamos a 1000 rpm, 2′.
• Leemos los resultados en la lámpara.

RESULTADOS

• La ausencia de aglutinación en todos los pasos indica compatibilidad y se puede realizar la transfusión.
• La aglutinación en cualquiera de los pasos indica incompatibilidad.
• La hemólisis en cualquiera de los pasos, también indica incompatibilidad.

EJERCICIOS

1. ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor? Suero del receptor con hematíes del donante.

2. Cuándo se debe realizar la prueba cruzada menor? Cuando se transfunde una gran cantidad de plasma.

3. ¿Por qué debemos realizar la prueba en medio salino o albuminoso? Para detectar todos los anticuerpos presentes.

4. ¿Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina humana de Coombs? Anticuerpos que se hayan quedado fijados en la membrana eritricitaria.