20/05/2015
OBJETIVO
Identificación de los anticuerpos irregulares, para el diagnóstico y tratamiento de la enfermedad hemolítica del recién nacido, trastornos hemáticos y prevención de reacciones transfusionales y en estudios durante el embarazo.
INTRODUCCIÓN
Anticuerpos irregulares son aquellos que se producen frente a antígenos distintos a los del sistema AB0. Suelen aparecer por una inmunización trasfusional o fetomaterna y pueden producir reacciones postrasfusionales.
La detección de los anticuerpos se realiza enfrentando el suero a una serie de hematíes tipados, de los que se conoce con exactitud los antígenos presentes en su membrana. El resultado positivo es la aglutinación de los hematíes. Se puede llevar a cabo por tres tipos de técnicas:
- Test de Coombs indirecto.
- Técnica enzimática.
- Técnica a 4ºC.
En el Coombs se incuba previamente el suero y los hematíes tipados, para conseguir la sensibilización de los últimos, es decir, que los anticuerpos presentes en el suero se unan a la superficie eritrocitaria. Después añadimos el suero de Coombs (antiglobulina humana) para poner de manifiesto la presencia o no de estos anticuerpos, mediante la aglutinación de los hematíes. Para acortar el tiempo de incubación, podemos emplear un medio de baja fuerza iónica o LISS.
La técnica enzimática consiste en tratar previamente los hematíes tipados con una enzima (tripsina, ficina o bromelina), para facilitar la aglutinación de los hematíes.
La técnica a 4ºC se utiliza para detectar las crioglobulinas o anticuerpos que reaccionan mejor a baja temperatura. Se incuba el suero y los hematíes a 4ºC, para posteriormente centrifugar y observar la presencia o no de aglutinación.
MÉTODO
Se emplea un panel de hematíes humanos pertenecientes a una casa comercial Kit Identisera Diana, de la casa comercial Diagnostic Grifols S.A. Para la técnica enzimática Identisera Diana P.
FUNDAMENTO
El papel de hematíes Diana consiste en una suspensión al 0,8% de hematíes del grupo 0, precedentes de 11 donantes distintos. Los hematíes difieren en su configuración antigénica y son elegidos para contribuir a la identificación de la mayoría de anticuerpos con significación clínica que aparecen con más frecuencia. Un anticuerpo reaccionará de forma específica con el antígeno que estimuló su producción. Mediante un test de Coombs indirecto, pondremos de manifiesto la existencia o no de anticuerpos irregulares en el suero del paciente. Debemos complementarla con otra técnica, bien enzimática o de crioglobulinas.
MATERIAL NECESARIO
- Tubos de hemólisis
- Gradilla
- Rotulador de vidrio
- Centrífuga
- Micropipeta de 10-100μl
- Pipeta graduada
- Baño de agua
REACTIVOS
- Hematíes tipados: 11 tubos de hematíes al 0,8% en medio tamponado con conservantes.
- Hematíes del paciente para autocontrol.
- Suero fisiológico al 0,9%.
MUESTRA
Plasma fresco, procedente de sangre anticoagulada.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
- Preparamos la suspensión de hematíes para autocontrol
Prácticas de Hematología y Citología 