PRÁCTICA Nº24. RECUENTO DE PLAQUETAS CON HEMOCITÓMETRO

15/01/2014

OBJETIVO

Aprender a contar plaquetas con una cámara de recuento neubauer.

FUNDAMENTO

Para el recuento de plaquetas en cámara, se diluye la muestra de sangre en un líquido apropiado, depositando la mezcla, posteriormente, en la cámara de recuento para su observación.

MATERIAL NECESARIO

• Microscopio

• Tubo de ensayo

• Micropipeta

• Pipeta de 2ml

• Prepipeta

• Gradilla

• Cámara de recuento neubauer

• Cubreobjetos

• Placa de petri

• Papel de filtro

 

REACTIVOS

• Agua destilada

• Líquido de dilución laboratorios Spinreact.

MUESTRA

Sangre venosa anticoagulada

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

• Vertemos en tubo de ensayo o,99ml aproximadamente de líquido de dilución, con ayuda de una pipeta.

• Añadimos 0,01ml de la sangre problema con ayuda de una picropipeta.

• Tapamos el tubo con parafilm y mezclamos.

•  Movemos suavemente el tubo con la muestra durante 5 minutos.
• Aspiramos una pequeña porción con ayuda de una pipeta pasteur, y depositamos una gota en cada uno de los retículos de la cámara de recuento.

• Colocamos un trozo de papel de filtro húmedo en una placa de petri.

• Introducimos la cámara de neubauer en su interior durante 15 minutos, para que las plaquetas sedimenten correctamente sin que se reseque la dilución.

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO

• Contamos uno de los cuadrados grandes del retículo, que puede ser el central.
• El condensador bajo facilita la visualizción.
• Las plaquetas se observan pequeñas y refringentes.

RESULTADO

Para calcular el número de plaquetas por mm3 de sangre, se aplica la siguiente fórmula:

PLT/mm3 = P x V x D = P x 1000

PLT/mm3: Nº de plaquetas por mm3 de sangre

P : Nº de plaquetas contadas en un cuadrado grande

V : Corrección del volumen (10)

D : Corrección de dilución

Nosotras hemos contado 130 plaquetas en un cuadrado grande, por lo que, aplicando la fórmula, nos da el siguiente resultado:

PLT/mm3 = 130 x 1000 = 130000 plaquetas/mm3 de sangre

EJERCICIOS

1. ¿Qué tipo de pipeta diluidora se utiliza en el recuento de plaquetas? La de Thoma para hematíes.

2. ¿ Qué funciones desempeña el líquido de dilución empleado? Rompe los hematíes, evita la agregación plaquetaria y hace las plaquetas refringentes.

3. ¿Cuánto líquido de dilución se necesita para efectuar un ensayo? 1ml, aproximadamente.

4. ¿Con qué se puede preparar una cámara húmeda? Con una placa petri y papel de filtro mojado.

5. ¿Con qué objetivo se cuentan las plaquetas? 40x.

6. ¿Cómo se aprecian los trombocitos en este recuento? Refringentes y de pequeño tamaño.