12/01/2015
OBJETIVO
Aprender a hacer recuentos de leucocitos con cámara de neubauer.
FUNDAMENTO
Consiste en la determinación del número de leucocitos presentes en un volumen de sangre determinado, generalmente 1mm3.
MATERIAL NECESARIO
- Microscopio.
- Pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos blancos.
- Tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora.
- Prepipeta.
- Cámara de recuento Neubauer.
- Cubreobjetos.
MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada
REACTIVOS
- Líquido de dilución Turck, compuesto por:
– 2ml de ácido acético glacial
– 1ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1%
– 100ml de agua destilada.
El ácido acético produce la lisis de los eritrocitos, sin alterar los leucocitos.
El violeta de genciana tiñe el núcleo de los leucocitospara que éstos puedan observarse mejor.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
La técnica y el proceso de realización de la práctica es la misma que utilizamos en el recuento de hematíes:
1. Colocamos el cubre sobre el retículo de la cámara.
2. Con la pipeta, aspiramos la sangre hasta la señal de 0,5 ó 1. Nosotros tomamos 1.
3. Limpiamos el exterior de la pipeta con una gasa, con cuidado de que no descienda el volumen de sangre.
4. Aspiramos líquido diluyente hasta la señal 11.
5. Desenganchamos el tubo de goma de la pipeta y movemos suavemente el contenido de forma horizontal, para que se mezcle la sangre con el líquido de dilución durante 2-3 minutos.
6. Desechamos las tres primeras gotas que se vierten con la pipeta y la siguiente gota la colocamos entre la cámara y el cubre por uno de los bordes de la cámara, dejándola que penetre por capilaridad. Debemos intentar que no rebose la sangre diluida, ni se formen burbujas.
Como tenemos dos retículos, echamos una gota en el borde externo de cada retículo.
7. Dejamos reposar la sangre diluida ya en la cámara, durante unos minutos. Así las células tienen tiempo de sedimentarse.
8. Ya tenemos la cámara preparada para el estudio al microscopio.
OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO
Se cuentan los leucocitos presentes en los cuatro cuadrados grandes de las esquinas, dividido a su vez en 16 cuadrados medianos.
Para su cálculo puede emplearse la siguiente fórmula:
WBC = L/4 x 10 x D
WBC = Recuento de leucocitos por mm3 de sangre
L = Leucocitos contados en 4 cuadrados grandes
D = Factor de dilución, en este caso 10.
RESULTADOS
Leucocitos contados en 4 cuadrados grandes: 316 leucocitos.
Factor de dilución: 10.
WBC = 316/4 x 10 x 10 = 7900 leucocitos por mm3 de sangre
EJERCICIOS
1. ¿Cuál es el líquido de dilución utilizado en el WBC? El de Turck.
2. ¿Para qué sirve el violeta de genciana que contiene el líquido de dilución? Para teñir el núcleo de los leucocitos.
3. ¿Con qué objetivo se pueden contar los leucocitos? Con el de 10x.
4. Si la sangre se diluye a 1/1o y se cuentan 100 leucocitos en dos cuadrados grandes periféricos, ¿cuál es el WBC obtenido?
WBC = 100/2 x 10 x 10
WBC = 5000 leucocitos por mm3 de sangre
Prácticas de Hematología y Citología 