PRÁCTICA Nº17. CONTAJE DE RETICULOCITOS

27-11-2014

OBJETIVO

Identificar los reticulocitos presentes en una muestra de sangre, reconocer y observar su aspecto, y ver la relación entre la cantidad presente de estas células, con respecto a 2000 hematíes.

FUNDAMENTO

Este tipo de análisis se suele realizar para:

• Evaluar la capacidad de la médula ósea de generar hematíes nuevos
• Diferenciar entre las causas de anemia
• Monitorizar la respuesta de la médula ósea y su recuperación funcional, tras quimioterapia o transplante de médula ósea.
• Seguimiento después de un tratamiento de anemia por deficiencia de ferropénica, Vit. B12, folato o insuficiencia renal.

El análisis se suele indicar cuando se observa:

• Descenso de los hematíes
• Descenso de la Hb
• Descenso del HTO y/o síntomas de anemia.
• Para evaluación de la funcionalidad de la médula ósea

Para la visualización de los reticulocitos utilizamos colorantes vitales, como el azul de metileno o azul cresil brillante, que dan lugar a precipitados de restos de ARN, los cuales se observan como filamentos azul intenso en el interior celular.

El reticulocito presentará cuatro grados diferentes de maduración, atendiendo al retículo presente en su interior, yendo desde un ovillo denso en el caso de los más inmaduros, hasta gránulos escasos, en los más maduros:

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MATERIAL NECESARIO

• Microscopio óptico

• Tubos de hemólisis

• Pipetas Pasteur

• Baño de agua

 

REACTIVOS

• Azul cresil brillante en polvo

• Solución salina al 0,9%

• Citrato sódico al 3%

• Agua destilada

• Aceite de inmersión

MUESTRA

Sangre anticoagulada con EDTA, que el profesor se ha extraído en la hora del almuerzo

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

1. Preparación del colorante

La mesa de revisión de esta semana se ha encargado de prepararlo.

El proceso ha sido el siguiente:

• Se han mezclado 80ml de suero salino con 20ml de de citrato sódico al 3%.
• Con una balanza de precisión, han pesado 1g de azul cresil brillante.
• A la mezcla anterior se le ha añadido el gramo de azul cresil brillante pesado.
• Se ha filtrado el colorante con papel de filtro, para evitar precipitados que puedan alterar la tinción.

2. Tinción de la muestra

• Echamos tres gotas de colorante en un tubo de hemólisis con otras tres gotas de sangre.

• Mezclamos con suavidad y tapamos con parafilm.

• Lo dejamos al baño maría durante 5 minutos.

• Una vez pasados los 5 minutos, movemos suavemente de nuevo, y añadimos una gota de la mezcla para hacer una extensión

• Extensiones realizadas

• Añadimos aceite de inmersión

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO

Enfocamos la muestra con el objetivo 100x. Los hematíes se ven teñidos de color verde-amarillento y los reticulocitos se distinguirán por los filamentos azul intenso del interior.

RESULTADO

Se cuentan los reticulocitos que hay entre 2000 hematíes. Podemos contar unos 25 aproximadamente. Si aplicamos la fórmula para calcular el porcentaje de reticulocitos que hay, obtenemos el siguiente resultado:

% reticulocitos = Nº de reticulocitos contados/ Nº de hematíes contados x 100

% reticulocitos = 25/2000 x 100

% reticulocitos = 1,25%

OBSERVACIONES

Dependiendo del microscopio de clase utilizado para la observación, los reticulocitos podían distinguirse o no. También hemos observado, que la muestra se ve mejor sin utilizar cubreobjetos que con él.

Esta es la primera visión que hemos obtenido con el microscopio, en la cual no se distinguen reticulocitos. Esta muestra lleva cubreobjetos.

EJERCICIOS

1. ¿Qué son los reticulocitos? Son glóbulos rojos que aún no han alcanzado la madurez total, por lo que se puede apreciar en su interior restos de ARN todavía.

2. ¿Qué tipo de tinción estamos utilizando? Azul cresil brillante, que es un colorante supravital.

3. ¿Por qué hacemos la corrección del porcentaje de los reticulocitos? Para poder considerarlo real.

4. ¿Qué nos expresa el IPR? Un valor numérico de la estimulación hematopoyética por encima de la actividad de la línea base normal.