PRÁCTICA Nº14. VISUALIZACIÓN DE UNA CÁMARA DE RECUENTO

OBJETIVO

Identificar las distintas partes de la cámara de recuento, la zona de trabajo y las diferenciaciones dentro del retículo central.

FUNDAMENTO

Los recuentos celulares pueden realizarse mediante métodos manuales (recuentos en cámara) o automáticos (recuentos en contadores electrónicos). La primera opción, aunque es una técnica con un amplio margen de error y con mucha necesidad de tiempo invertido y elevado volumen de trabajo, es muy útil, pues los resultados obtenidos permiten la detección de alteraciones cuantitativas de las distintas células sanguíneas.

En clase vamos a utilizar la cámara neubauer.

Cámara de neubauer

También se llama cámara cuentaglóbulos o hemocitómetro. Consiste en una placa gruesa de cristal con forma de porta, cuya porción central está dividida en 3 ejes perpendiculares al eje longitudinal de la cámara. De ellas, las dos laterales se hallan sobreelevadas 0.1 mm con respecto a la central, y en esta última hay grabado un retículo cuadrangular ( cámara simple).

La banda central puede estar, a su vez, subdividida en 2 semi bandas idénticas y separadas por un surco paralelo al eje longitudinal de la cámara ( cámaras dobles). En cada una de estas dos semibandas hay grabado un retículo idéntico que facilitará el recuento celular. La siguiente figura muestra las dimensiones de dicho retículo:

Tal y como puede apreciarse en la figura, cada retículo se divide en nueve cuadrados grandes de 1mm de lado. Siendo los cuadrados de las esquinas los destinados al recuento de leucocitos ( al existir éstos en menor número que hematíes, se precisa menor número de líneas de referencia), a su vez dichos cuadrados se subdividen en 16 cuadrados denominados medianos de 0.25 mm de lado.

El cuadrado central es el destinado al recuento de hematíes y plaquetas. Dicho cuadrado se subdivide en 25 cuadrados medianos ( 0.2mm de lado), y a su vez éstos se subdivide en 16 cuadros denominados pequeños. Por tanto el número total de cuadraditos constituyentes del cuadro central es de 400 cuadrados.

MATERIAL NECESARIO

• Cámara de recuento neubauer

• Microscopio

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

1. Observar con el microscopio el retículo de la cámara de recuento:

• Primero con el objetivo 4x.

 

Se pueden observar todas las secciones del retículo.

• Con el objetivo 10x.

Arriba, cuadro grande central. Abajo, cuadro grande periférico.

• Por último, con el objetivo 40x.

2. Enfocamos con el objetivo 10x uno de los cuadrados grandes de una de las esquinas del retículo.

Contamos el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande periférico: Observamos que hay 16.

Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retículo es de 3mm, calculamos:

• La longitud de los lados de cada cuadrado grande periférico: 3mm totales, entre 3 cuadrados grandes que tiene el retículo por lado:

3 mm / 3 cuadros grandes = 1mm cada cuadro grande

• La longitud de los lados de cada cuadro mediano englobado en el cuadro grande periférico: Si cada cuadrado grande tiene cuatro cuadrados medianos por lado, y cada cuadrado grande mide 1mm: 

           4 cuadrados medianos / 1mm = 0,25mm cada cuadrado mediano

Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0,1mm, calculamos el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento a los siguiente niveles:

• El retículo entero:

3mm largo x 3mm ancho x 0,1mm alto = 0,9mm cúbicos de sangre diluida

• Un cuadrado grande periférico:

1mm largo x 1mm ancho x 0,1mm alto = 0,1mm cúbicos de sangre diluida

• Un cuadrado mediano incluido en un cuadrado grande periférico: 

0,25mm largo x 0,25mm ancho x 0,1mm alto = 0,00625mm de sangre diluida

3. Enfocamos con el objetivo 10x el cuadrado grande central.

Contamos el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande central: Observamos que tiene 25 cuadrados medianos.

Contamos el número de cuadrados pequeños englobados en uno de esos cuadrados medianos: Cada cuadrado mediano está subdividido en 16 cuadrados pequeños.

Teniendo en cuenta que la longitud de cada lado del retículo es de 3mm, calculamos:

• La longitud de los lados del cuadrado grande central:

3 mm / 3 cuadros grandes = 1mm cada cuadro grande

• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos incluidos en el cuadrado grande central: El cuadrado grande central contiene 5 cuadrados medianos por lado.

1mm total / 5 cuadrados medianos = 0,2mm cada cuadro mediano

• La longitud de los lados de cada uno de los cuadros pequeños que contiene cada cuadrado mediano: Cada cuadro mediano central tiene 4 cuadrados pequeños por lado.

0,2mm / 4 cuadrados pequeños = 0,05mm cada cuadrado pequeño

Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo u el cubre es de 0,1mm, calculamos el volumen de sangre diluida también a estos niveles:

• El cuadro grande central:

1mm largo x 1mm ancho x 0,1mm alto = 0,1mm cúbicos de sangre diluida

• Un cuadrado mediano englobado en el cuadrado grande central: 

0,2mm largo x 0,2mm ancho x 0,1mm alto = 0,004mm cúbicos de sangre diluida

• Un cuadrado pequeño incluido en uno de esos cuadrados medianos:

0,05 x 0,05 x 0,1 = 0,00025mm cúbicos de sangre diluida

RESULTADO

Hemos aprendido a identificar las diferentes zonas del retículo de la cámara de recuento neubauer, para así poder manejarla mejor con una muestra real. En la práctica siguiente nos pondremos a ello.

EJERCICIOS DE AUTOEVALUACIÓN

1. En una cámara de recuento, ¿cuánto están sobreelevadas las dos bandas laterales con respecto a la  central donde está grabado el retículo? 0,1mm.

2. ¿Cómo debe ser el líquido de dilución utilizado para el recuento de hematíes? Isotónico.

3. En algunos recuentos electrónicos, a la menor dilución de la muestra de sangre se le añaden varias gotas de un reactivo que pueden contener cianuro y un detergente no iónico. Este reactivo debe actuar durante unos minutos y produce: 

• Lisis de los hematíes.
• Transformación de la hemoglobina en cianmetahemoglobina.

4. ¿En qué componente de un contador electrónico se cuentan, realmente, las células sanguíneas? Dispositivo de medida.

5. ¿Cuál no es un método electrónico de recuento celular? Método de la reflexión de la luz ultravioleta.

6. ¿Qué enzima se cuantifica, en algunos autoanalizadores hematológicos, para clasificar los leucocitos? Peroxidasa.

7. Cuabdo una cámara de recuento, tipo Neubauer mejorada, está montada, ¿qué volumen de sangre diluida hay a nivel de 5 cuadrados medianos contenidos en el cuadrado central del retículo? 0,02mm3.