PRÁCTICA Nº35. DETERMINACIÓN DEL TEST DE HOWELL

OBJETIVO

Medir el tiempo que tarda en coagular un plasma rico en plaquetas (PRP), obtenido a partir de una muestra de sangre anticoagulada con citrato, cuando se vuelve a recalcificar.

FUNDAMENTO

El fundamento de esta práctica es la recalcificación de la muestra, su incubación a 37ºC y la medición del tiempo.

MATERIAL NECESARIO

• Rotulador de vidrio

• 4 tubos de centrífuga (dos de ellos para compensar)

• Gradilla

• Pipetas pasteur de plástico

• Baño de agua

• Cronómetro

• Centrífuga

• Micropipeta capacidad de 100μl.

• Puntas desechables amarillas para micropipeta.

 

 

MUESTRA

• Plasma rico en plaquetas (PRP), si no hay en ependorff, se prepara centrifugando a 1000 rpm durante 10′.
• Pool de plasma como control o PPP.

REACTIVOS

• Suero salino
• R2 de TTPA CaCl, 300μl aproximadamente en otro tubo.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

• Llenamos dos tubos de centrífuga de plástico hasta la mitad y los centrifugamos a 1000 rpm durante 10′ (Si ya hay PRP preparado, lo cogemos directamente)
• Retiramos el plasma con ayuda de una pipeta pasteur de plástico y lo depositamos en otro tubo, que colocamos en una gradilla e identificamos como PRP.
• En un tubo de hemólisis con letra M, añadimos 100μl de PRP.
• En otro tubo de hemólisis con letra C, añadimos 100μl de pool de plasma.
• Llenamos en otro tubo de ensayo, suero salino (300μl) y otro con R2 CaCl (300μl)
• Los introducimos en baño de agua de 2-5 minutos.
• Antes de 5′, añadimos a cada tubo de M y C 100μl de cada reactivo, los cuales moveremos antes de echarlos.
• Desde el momento de añadir el reactivo, conectamos el cronómetro y movemos los tubos de delante hacia atrás, suavemente, parando el cronómetro al observar enturbamiento.
• Anotamos el resultado de cada tubo.