OBJETIVO
Determinar la cantidad de hierro en sangre, utilizando el espectrofotómetro.
FUNDAMENTO
El hierro se disocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil. El hierro libre se reduce a ión ferroso mediante el ácido ascórbico.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hierro en la muestra.
MATERIAL
- Espectrofotómetro
- Tubos de ensayo
- Pipetas y prepipeta
MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada
REACTIVOS
- R1 Tampón Acetato pH 4,9 100mmol/L
- R2 Reductor Ácido ascórbico 99,7%
- R3 Color FerroZine 40mmol/L
- Patrón 100 microg/L
Para preparar el reactivo de trabajo (RT), disolvemos el contenido de un tubo de R2 en el de R1. Lo tapatos y movemos suavemente, hasta disolver el contenido.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1. Condiciones del ensayo:
- Longitud de onda: 540 nm
- Cubeta: 1cm paso de luz
- Temperatura: 37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear:
4. Mezclamos según las cantidades de la tabla y los dejamos reposar durante 10 minutos.
RESULTADOS
MUESTRA: 1,537
BLANCO MUESTRA: 1,529
PATRÓN: 0,078
CÁLCULOS
(1,537-1,529)/0,078 X 100= 10,25 Microg/dl de hierro
Prácticas de Hematología y Citología 